АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция

Микробиологическая диагностика легионеллеза

Читайте также:
  1. III. Диагностика супружеских отношений
  2. Ангина Симановского-Венсана. Этиология, патогенез, фарингоскопическая картина, дифференциальная диагностика, методы лечения.
  3. Ангины. Клиника, диф диагностика и лечение.
  4. Апластические анемии: этиология, патогенез, клиника, классификация, диагностика, принципы лечения.
  5. БОРРЕЛИОЗ СИСТЕМНЫЙ КЛЕЩЕВОЙ (БОЛЕЗНЬ ЛАЙМА): этиология, эпидемиология, диагностика.
  6. ВИЧ-ИНФЕКЦИЯ: этиология, эпидемиология, патогенез, клиника, диагностика, лечение, профилактика.
  7. Возбудители анаэробной газовой инфекции. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
  8. Возбудители бруцеллеза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика бруцеллеза. Специфическая профилактика и лечение.
  9. Возбудители коклюша и паракоклюша. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
  10. Возбудители лептоспироза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
  11. Возбудители сальмонеллёзов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика сальмонеллёзов. Принципы профилактики и лечения.
  12. Возбудители туберкулеза и микобактериозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика туберкулеза. Специфическая профилактика и лечение.

Легионеллы относятся к отделу Gracilicutes, семейству Legionellaceae, роду Legionella, который представлен 9 видами: L.pneumophila, L.bozemanii, L.micdadei, L.dumoffii, L gormanii,L.longbeachae, L.jordanis, L.wadsworthii, L.oakridgensis.

Легионеллы представляют собой мелкие грамотрицательные палочки длиной 2-3 мкм (иногда выделяются более крупные формы до 20-50 мкм) с выраженной тенденцией к полиморфизму. Бактерии хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе, содержат жировые включения, окрашиваемые суданом черным; по Граму окрашиваются отрицательно. Легионеллы подвижны, спор не образуют..

Бактериальная клетка легионелл обладает целым набором факторов патогенности (эндотоксин, цитотоксин, гемолизин, протеаза, действующая на белки сыворотки крови).

Легионеллы являются аэробами, хорошо растут в присутствии СО2, весьма пребовательны к условиям культивирования; растут только на специальных сложных средах. Для культивирования требуются максимально обогащенные среды со специальными добавками, такими как L-цистеин, пирофосфат железа. Наиболее оптимальной средой является угольно-дрожжевой агар (УДА). В целом для всей группы легионелл наиболее надежным методом считается культивирование в куриных эмбрионах.

Материал для исследований может быть представлен плевральной жидкостью, реже мокротой, кровью, мочой. Для исследований также используют транстрахеальный аспират, бронхоскопический. легочный биопсийный и аутопсийный материалы.

В диагностике применяют бактериологический, биологический (более надежный), серологический методы.

Микроскопический метод. Бактерии окрашиваются по Романовскому-Гимзе и Хименсу(исключение –нативный материал из мокроты).

Для экспресс диагностики можно мазки импрегнировать серебром или люминесцентной сывороткой.

Бактериологический метод. Первичный посев производят на забуференный УДА со всеми добавками и рН 6.9.первичный материал растет медленно, поэтому чашки инкубируют в течение 2-14 дней при 35°С во влажной атмосфере. Выросшие колонии обычно менее 2 мм в диаметре, полупрозрачные, бесцветные либо с сероватым оттенком, гладкие блестящие с приподнятым краем. На средах с тирозином образуют колонии с коричневым пигментом. Некоторые виды легионелл обладают аутофлюоресценцией – УФ лучи возбуждают бело-голубое свечение. Культуру, выросшую на УДА подвергают идентификации МФА (метод флюоресцирующих антител) с использованием люминисцирующих сывороток к основным серогруппам легионелл. В спорных случаях используют анализ жирных кислот, ДНК-гомологии, иммунологическое тестирование с набором поли- и моновалентных сывороток.

Определение чувствительности к антибиотикам не рекомендуется, так как результаты исследований in vitro могут не совпадать с клинической эффективностью.

Серологическая диагностика. Наиболее распространен непрямой вариант МФА и РНГА. Также используется ИФА. Четырехкратное нарастание титров антител (сероконверсия) свидетельствует о наличии активного инфекционного процесса и позволяет с высокой степенью надежности устанавливать или подтверждать диагноз. Недостатком этих методов следует считать ретроспективный анализ диагностики, так как выраженную сероконверсию можно выявить лишь на 2-3 неделе заболевания.

Непрямой метод флюоресцирующих антител. Убитую кипячением культуру легионелл наносят на предметное стекло и фиксируют. На препарат наносят сыворотку больного с разведением 1:32 и более. После 15 минут инкубации наносят люминесцирующий иммуноглобулин против глобулинов человека, повторно инкубируют, промывают в фосфатном буфере и микроскопируют. Максимальное разведение сыворотки, в котором обнаруживается специфическое свечение, является титром специфических антител (диагностический титр-1:64).

ИФА. Применяют непрямой вариант метода.

Иммунологические экспресс методы по выявлению антигенов.

Наибольшее распространение получил прямой метод МФА, который используется для ранней диагностики легионеллеза и при проведении моторинга за различными водными системами и сооружениями на наличие легионелл. По чувствительности не уступает культуральному методу и позволяет обнаружить возбудителей в нативном материале (за исключением мочи) независимо от их жизнеспособности. На приготовленный из нативного материала и фиксированный в ацетоне мазок наносят каплю легионеллезной люминесцирующей сыворотки и инкубируют во влажной камере 15-20 минут при 37°С. После промывки в фосфатном буфере мазок просматривают в люминесцентном микроскопе. В положительных случаях обнаруживается изумрудно-зеленое свечение легионеллезных бактерий.

ИФА позволяет выявить легионеллезный антиген в клиническом материале, включая мочу, и представляет собой прямой вариант реакции.

Реакция коагглютинации является специфическим и чувствительным методом определения легионелл в материале различного происхождения. В реакции используются золотистые стафилококки, меченные легионеллезными иммуноглобулинами.

 


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 |

Поиск по сайту:



Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.004 сек.)